别孕烯醇酮对6-羟基多巴胺损伤的细胞系SH-SY5Y的保护作用

目的 明确别孕烯醇酮（APα）对6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用，并阐明可能的分子机制。方法 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体（GABAAR）拮抗剂荷包牡丹碱（Bic）和电压门控L型Ca²⁺通道拮抗剂硝苯地平（nifedipine），采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞的变化，Western blotting检测胞质钙调蛋白（CaM）、钙离子 钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ3（CaMKⅡδ3），胞核CaMKⅡδ3、脑源性神经营养因子（BDNF）和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK1）表达的变化，采用蛋白质免疫共沉淀验证CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF的相互作用。 结果 APα作用后，6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）阳性细胞数目均明显增加，而TH/BrdU双阳性细胞数目无显著变化；同时Western blotting结果表明，SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯 6-OHDA 组相比也明显上升，经Bic处理后各蛋白增加更为明显。免疫共沉淀结果表明，CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用。 结论 APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中，GABAAR发挥负性调控作用，通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的，其中Ca²⁺ -CaM-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用。     

结直肠癌组织浸润免疫细胞组成及特征

目的：研究结直肠癌（CRC）患者和健康人大肠组织中免疫细胞的浸润情况,为后续开展肿瘤微环境的研究提供前期的分析结果和数据。方法：通过GEO数据库对51例正常人结直肠组织和333例CRC患者肿瘤组织的基因表达谱数据进行计算分析,通过CIBERSORT方法将基因表达谱数据转化为组织中22种免疫细胞的浸润比例,对比这些免疫细胞在两者中的分布情况。结果：肠道浸润的免疫细胞组成在CRC患者与健康人之间有较大差异。T细胞和B细胞在肿瘤组织中的浸润数量少于健康人,而巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞和树突状细胞在肿瘤组织中的浸润数量大于健康人。结论：CRC患者和健康人的结直肠组织中免疫细胞浸润存在较大的差异,这些具有差异的免疫细胞在癌症进展中可能发挥重要作用。     

心踝血管指数、年龄及其交互作用与颈动脉粥样硬化的关联分析

目的：探索心踝血管指数（CAVI）、年龄及其交互作用与颈动脉粥样硬化早期识别的关联性。方法：对2010年5月1日至2011年9月30日,在安徽医科大学第一附属医院临床体检中心进行常规体检的328名受试者,进行CAVI的重复测定和颈动脉超声检测,多元广义线性模型探索CAVI、年龄及其交互作用与颈动脉硬化的关联性。结果：高、中、低CAVI人群颈动脉粥样硬化的发生率分别为90.9%、57.0%和19.8%,校正年龄、性别、体质量指数（BMI）、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖等潜在的混杂因素后,与CAVI最低组比较,中等和较高CAVI水平者发生颈动脉粥样硬化的风险分别是对照组的2.2倍（OR：2.2,95%CI：1.0～4.9）和4.4倍（OR：4.4,95%CI：1.5～13.3）;与低年龄组比较,中、高年龄组发生颈动脉粥样硬化的风险分别是对照组的8.1倍（OR：8.1,95%CI：3.5～18.8）和52.3倍（OR：52.3,95%CI：14.9～183.5）,CAVI水平及年龄均与颈动脉粥样硬化的发生风险存在显著的正相关关系（趋势性检验P〈0.001）;与低龄且低CAVI人群比较,低龄高CAVI、高龄低CAVI和高龄高CAVI人群颈动脉粥样硬化的发生风险分别是对照组的6.6、17.3和57.1倍。结论：CAVI是颈动脉硬化的独立危险因素,在预测颈动脉粥样硬化发生风险方面与年龄间存在协同效应。     

卡铂联合紫杉醇腹腔化疗对高级别浆液性卵巢癌的疗效

目的：研究卡铂联合紫杉醇腹腔化疗对高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）的疗效。方法：选取2015年1月至2019 年7月温州医科大学附属第一医院收治的110 例HGSOC患者,根据治疗方式不同分为卡铂联合紫杉醇静脉化疗组（A组）34例,卡铂联合紫杉醇腹腔化疗组（B组）30例,顺铂联合紫杉醇腹腔化疗组（C组）28例,传统化疗药（环磷酰胺、阿霉素等）静脉化疗组（D组）18例。比较各组患者生存情况及不良反应,评判卡铂联合紫杉醇腹腔化疗治疗HGSOC的实用性、有效性与安全性。结果：A组、B组、C组5年生存率较D组均显著增高,组间差异有统计学意义（P ＜0.05）;B组、C组3年生存率亦较D组增高,组间差异有统计学意义（P ＜0.05）;而A组、B组、C组间3年、5年生存率差异均无统计学意义（P ＞0.05）。4组间III、IV级骨髓抑制的发生率差异均无统计学意义（P ＞0.05）。III、IV级胃肠道反应与腹痛发生情况：C组、D组分别与A组、B组比较,差异均有统计学意义（P ＜0.05）,但A组与B组间、C组与D组间差异无统计学意义（P ＞0.05）。4组间皮疹发病率差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论：卡铂联合紫杉醇腹腔化疗可以延长HGSOC患者的生存时间,提升临床治疗效果,且不良反应较小。     

骨膜去细胞生物支架在骨缺损小鼠体内的血管化机制

目的：观察骨膜去细胞生物支架对小鼠股骨骨缺损的修复作用及支架内血管形成过程,探讨其血管形成的可能机制。方法：采用物理冻融、化学和生物酶试剂等序贯处理获得骨膜去细胞生物支架。体外实验方面,通过细胞划痕试验观察骨膜去细胞支架浸提液对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）迁移的影响以评价骨膜去细胞支架中是否存在促血管化的生物因子,同时通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支架中的血管内皮生长因子（VEGF）。在体动物实验方面,通过建立小鼠股骨骨缺损模型评价骨膜去细胞生物支架通过促血管化诱导骨修复的可能性。在小鼠股骨远端制备0.5 mm直径的单皮质骨缺损后,于骨缺损处植入骨膜去细胞支架后逐层缝合切口,对照组小鼠骨缺损处不放置材料。分别在术后第7天、第14天、第21天和第28天,取材、固定、脱钙、包埋和切片,通过HE染色评价骨缺损区骨修复情况,通过免疫荧光染色观察血管性血友病因子（vWF）以评价缺损区血管化情况。结果：体外细胞实验表明,去细胞骨膜支架浸提液对HUVEC的增殖没有明显的抑制作用;细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,支架浸提液组细胞的迁移面积更大,去细胞骨膜支架浸提液能够有效促进HUVEC的迁移并且在支架浸提液中检测到VEGF,其浓度为210 pg/mL。动物实验方面,HE染色证明去细胞骨膜支架可以促进骨缺损区域血管的生长和新骨形成,免疫荧光染色进一步证明去细胞骨膜支架对骨缺损的修复活动伴随血管化的发生过程,且去细胞骨膜支架中血管的密度随时间延长呈现先增多后减小的趋势。结论：去细胞骨膜支架可以血管化,并且促进骨缺损的愈合。VEGF可能是其血管形成过程中的关键因素。     

不同肾小球滤过率评估公式在2型糖尿病患者中的适用性

目的：比较不同肾小球滤过率（GFR）评估公式对2型糖尿病（T2DM）患者肾功能的诊断价值。方法：回顾性分析322例T2DM患者的资料，以24小时肌酐清除率计算得到的GFR为标准肾小球滤过率（rGFR），以C-G公式、简化MDRD公式、改良的MDRD中国公式和CKD-EPI公式计算得到的GFR为估算的肾小球滤过率（eGFR），比较各eGFR的准确度、精确度和偏差、ROCAUC，并根据不同年龄、糖化血红蛋白分层分析。结果：CKD-EPI公式估算的GFR与rGFR的相关系数最高（r=0.788）。CKD-EPI公式的15%准确度（P15）、30%准确度（P30）最高，分别为48.1%、73.6%。Bland-Altman图显示简化MDRD公式的偏差最小，CKD-EPI公式精确度最高。MDRDC公式、CKD-EPI公式诊断慢性肾功能不全的ROCAUC相等且最大。年龄≥60岁组和18～60岁组中均以CKD-EPI公式的P30、P50最高，精确度最好。CKD-EPI公式在不同糖化血红蛋白组精确度均最好，准确度均最高。结论：CKD-EPI公式更适合于估测我国T2DM患者的GFR，同时在不同年龄、糖化血红蛋白下均最适用。     

30例T2N0M0期非小细胞肺癌立体定向放射治疗临床疗效分析

目的 探讨利用体部立体定向放射治疗（SBRT）技术治疗T₂N₀M₀期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效及不良反应。方法 回顾性分析接受SBRT治疗的30例不适合手术T₂N₀M₀期NSCLC患者的临床资料,探讨其总生存率、无进展生存率、肿瘤特异性生存率和不良反应。结果 中位随访时间18.4个月。1、2、3年的总生存率分别为92.2%、92.2%和80.6%,肿瘤特异性生存率分别为95.7%、95.7%和83.7%,无进展生存率分别为70.2%、54.1%和40.6%,局部控制率分别为100%、94.4%和94.4%,区域控制率分别为84.2%、72.1%和54.1%,远处控制率分别为84.6%、72.4%和64.3%。20例患者出现1级放疗相关不良反应;5例患者出现≥2级的放射性肺炎;1例患者出现4级放射性肺炎。结论 SBRT治疗对不适合手术的T₂N₀M₀期NSCLC患者有较好的疗效,不良反应可耐受。     

大鼠胰腺去细胞天然支架生物相容性的鉴定

目的通过离体灌注化学去垢剂的方法制备大鼠胰腺去细胞天然生物支架,并对支架的完整性、生物相容性进行检验。方法健康成年SD大鼠30只,分别经胆管与血管两条途径灌注十二烷基硫酸钠和曲亚通X-100等药品洗脱,获取胰腺去细胞生物支架。通过HE染色、扫描电子显微镜和透射电子显微镜等观察细胞残留于去细胞支架的生物学特性,分光光度计法鉴定残留去垢剂量,酶联免疫吸附剂测定法测定残留支架蛋白含量及生长因子,并用腹壁与皮下包埋实验检验其炎症反应,MTT法测定支架细胞毒性,内皮细胞共培养测定支架生物相容性。结果 HE染色、扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察均表明去细胞支架无细胞残留,细胞外支架连续性完好,脉管支架保存完整;药物残留小于规定标准;细胞外支架生长因子及支架蛋白存留量等指标上血管组均优于胆管组;腹壁与皮下包埋实验显示,去细胞支架炎性反应较对照组明显减轻;MTT法显示无细胞毒性;内皮细胞共培养有黏附趋势。结论使用两种灌注法制备胰腺去细胞生物支架,均可将细胞去除彻底,支架生物相容性好。但就血管组细胞外支架保留完整性,生长因子保留更多,则血管灌注途径优于胆管灌注途径。     

肿瘤相关成纤维细胞来源外泌体ciRS-7经miR-7/IGF1R轴促进胰腺癌细胞糖酵解

目的：探讨肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）来源外泌体ciRS-7对胰腺癌细胞糖酵解代谢的影响。方法：采用超速离心法提取CAFs外泌体,并通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测外泌体中ciRS-7的表达及胰腺癌细胞糖酵解关键酶mRNA的表达;构建含ciRS-7 野生及突变序列的荧光素酶检测报告质粒,在胰腺癌细胞中验证ciRS-7与miR-7的关系;蛋白质印迹（Western blot）法检测IGF1R/AKT蛋白表达。结果：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中表达上调（P ＜0.05）;CAFs释放的外泌体促进胰腺癌细胞糖酵解和增殖（P ＜0.05）;敲降胰腺癌相关成纤维细胞ciRS-7的表达,其外泌体可抑制胰腺癌细胞糖酵解相关基因的表达（P ＜0.05）;ciRS-7在胰腺癌细胞中经miR-7/IGF1R/AKT通路促进癌细胞糖酵解（P ＜0.05）。结论：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中高表达,下调ciRS-7具有抑制胰腺癌细胞糖酵解的作用。